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蛋白穩(wěn)定性分析儀通過(guò)檢測(cè)溫度變化/變性劑濃度變化過(guò)程中蛋白內(nèi)源紫外熒光（350 nm/330 nm比值）的改變，獲得蛋白的熱穩(wěn)定性(Tm值)、化學(xué)穩(wěn)定性（Cm值）等參數(shù)。相比傳統(tǒng)的方法，無(wú)需添加染料，通量高，樣品用量少，數(shù)據(jù)精度高。
蛋白穩(wěn)定性分析儀
技術(shù)原理：
蛋白質(zhì)是生物體中廣泛存在的一類生物大分子，具有特定立體結(jié)構(gòu)的和生物活性以及諸多功能，根據(jù)這些功能我們可以將其應(yīng)用于蛋白質(zhì)的分子設(shè)計(jì)、蛋白質(zhì)功能的改造、疾病的基因治療以及新型耐抗藥性藥物的開(kāi)發(fā)與設(shè)計(jì)甚至是發(fā)現(xiàn)生物進(jìn)化的規(guī)律等良好科研領(lǐng)域上。因此，蛋白質(zhì)具有非常重要的研究?jī)r(jià)值。
進(jìn)行蛋白質(zhì)性質(zhì)和功能研究的前提是獲得穩(wěn)定的蛋白質(zhì)樣品，而由于蛋白質(zhì)自身性質(zhì)的復(fù)雜性，難以保證獲得的蛋白質(zhì)樣品是否具有正確的三維結(jié)構(gòu)以及功能，因此急需一種技術(shù)手段或設(shè)備，對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性進(jìn)行分析，確定獲得蛋白質(zhì)適宜的緩沖液條件、蛋白質(zhì)的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性等。另外在進(jìn)行蛋白質(zhì)-配體小分子相互作用研究時(shí)，因?yàn)樾枰�篩選的小分子配體數(shù)量巨大，因此也急需一種技術(shù)手段或設(shè)備，可以高通量的對(duì)配體結(jié)合進(jìn)行篩選。
蛋白中的色氨酸和酪氨酸可以被280 nm的紫外光激發(fā)并釋放出熒光，其熒光性質(zhì)與所處的微環(huán)境密切相關(guān)。蛋白變性過(guò)程中，色氨酸從疏水的蛋白內(nèi)部逐漸暴露到溶劑中，熒光釋放的峰值也從330 nm逐漸轉(zhuǎn)移到350 nm。
差示掃描熒光法(differential scanning fluorimetry，DSF)是一種方便快捷的高通量藥物篩選及靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)的方法，通過(guò)熒光染料或蛋白內(nèi)源熒光信號(hào)監(jiān)測(cè)升溫過(guò)程中蛋白構(gòu)象的變化計(jì)算其熔解溫度Tm（折疊蛋白與去折疊蛋白相等時(shí)的溫度）。該方法具有蛋白樣品損耗少、通量高、溫度變化范圍廣及數(shù)據(jù)準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性（蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性參數(shù)及其影響因素）、蛋白結(jié)構(gòu)和構(gòu)象、蛋白-配體相互作用及蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑、抑制劑、輔助因子等領(lǐng)域的研究。
蛋白質(zhì)穩(wěn)定性分析儀
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