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液相色譜儀是實驗室中經常會運用到的儀器，這里收集匯總了一些關于液相色譜儀使用的步驟和相關注意事項，幫助大家更加便捷地使用。

水相中的溶質溶解方式

水相中需溶解的無機鹽和表面活性劑等固體溶質，建議采用加熱法，不建議采用振搖、超聲等方式，因為此類溶解方式，可能會使溶質處于“臨界膠團濃度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有機溶劑、溫度劇降等），極易析出少量結晶；而一旦析出，便將損傷儀器和色譜柱，呈現泵頭處析出“鹽和白色粉末”的現象。

流動相的配制與使用

1、恒度洗脫

一定是將水相與有機相混合后、抽濾（使用混合型過濾膜），用一個管路（如A管）泵入儀器，這是使用的原則。切勿因節約有機相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個管路（一個純水相、一個純有機相）泵入儀器，即便配制了脫氣機，因為此種情形極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。

剩余流動相完全可繼續使用，密封后放置陰涼處；待下次試驗時與新配制的流動相混合后抽濾即可。無需擔心發霉、無機鹽析出、揮發、比例不準等問題，這些皆為疑神疑鬼的表現。實踐是檢驗真理的標準！實踐吧~

2、梯度洗脫

流動相配制最為科學的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機相、B相為低比例的水相-高比例的有機相（英國藥典幾乎均如此）；

其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機相、B相為純有機相；最不科學的為：A相為純水相、B相為純有機相，如既有質量標準采用了此種方式，建議改為第二種或頭一種方式，否則基線漂移嚴重，難以進行穩定的雜質檢測。

梯度洗脫結束后，建議經5分鐘回到初始狀態，再平衡5分鐘后開始下一針測定。這10分鐘的穩定極為關鍵。切勿短時間內回到初始狀態，會對儀器和色譜柱損傷較大。

色譜柱的安裝

標準SOP應為：

取A管路放入流動相瓶中→擰松泵頭→流速由0mL/min逐漸升至10mL/min，觀察尾液是否呈瀑布狀流出，持續10秒→擰緊泵頭→流動相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出，觀測是否呈拋物線狀，持續5秒→流速逐步降至1.0mL/min →安裝色譜柱，待20秒后，流動相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再安裝另一端→手握兩端螺絲帽，擰緊。

以上安裝順序遵循的是：

逐級排放氣泡和儀器內存留的洗液，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗梯度洗脫連續一周，頭一針與最末一針主成分保留時間相差在6秒以內。

試驗后色譜柱的清洗

1、最為常用的C8柱、C18柱

（1）流動相僅為水或甲醇-水時

繼續沖洗30分鐘，流速1.0mL/min，柱溫保持試驗時溫度，即可。

（2）水相中有無機鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質時先采用純水（或含有2%甲醇），沖洗A管路（試驗采用哪個管路，就要從頭到尾沖洗該管路），時間30分鐘（如流動相中有表面活性劑，適當增加時間），流速1.0mL/min，柱溫可較試驗溫度高出5~10℃；隨后更換成20%甲醇再沖洗30分鐘，流速1.0mL/min，柱溫箱加熱裝置關閉。結束后取下色譜柱放置陰涼處。

其后如果采用高比例的甲醇沖洗，會導致殘余的有機相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中析出，也導致了色譜柱壽命大為縮短。

2、其他類型色譜柱

查詢獲取如何科學合理地使用與清洗保存該類型色譜柱的方法，切勿盲動，否則導致色譜柱性能急劇下降。

試驗順序

工作流程應如下進行：

1、0~2小時 配制流動相、對照品和供試品溶液等，切勿催促昨日試驗同事。

2、2~3小時 采用A管路注入流動相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脫才用到B管路），平衡1小時。如流動相中有表面活性劑，建議前一晚小流速過夜，第二天上班后將流速增至1.0mL/min，平衡1小時后即可開始做試驗。

3、3~5小時 測定空白溶劑，一定要做到基線不漂移后方可開始測定。所謂“不漂移”，通常系指以1.0%自身對照溶液主成分峰高約20%高度來設定的視野范圍觀察所得，切不可設定得過小，使得雜質峰顯得很突兀、基線抖動得很厲害，弄得人很擔心。

4、5~8小時 配制完所有樣品，預試了對照溶液和供試品溶液，設定好自動進樣程序，程序最末一針設定為小流速過夜，紫外燈關閉。切勿設定為切換至B管路洗脫，此舉得不償失。

5、9~24小時 放心回家，讓儀器自動進樣，除非不穩定的樣品（配制一份測定一針）。充分利用下班后的16小時，做到從容不迫、。如單位還無自動進樣裝置，建議向領導申請購買，因一臺自動媲美三臺手動。

6、第二天0~0.5小時 檢查并計算昨晚試驗結果，如發現不良記錄，將流速增至1.0mL/min，平衡30分鐘后，測定重新配制的該份樣品即可（同時回校對照一針）。無需全部重新測定，不要過度謹小慎微。

7、第二天0.5~2.0小時 如上沖洗色譜柱，交給其后試驗同事。