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產品內容:
試劑一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×2 瓶,4℃避光保存。臨用前配制,加入 5mL 蒸餾水,充分溶解后加入 2.5ml 試劑二,混勻。
標準品:液體×1 支,1mmol/L 無機磷標準液,4℃保存。
產品說明:
無機磷主要指磷酸根,參與生物體內多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質磷酸化和脫磷酸化等等,此外促進碳水化合物的合成、轉化和轉運。
鉬藍與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質,通過測定 660nm 光吸收,即可計算無機磷含量。
自備儀器和用品:
離心機、水浴鍋、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水。
操作步驟:
一、無機磷提取:
取約 0.1g 組織,加試劑一 1mL 冰上充分勻漿,4℃,10000rpm,離心 10min,取上清液,待測。二、測定:
1. 可見分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上,調節波長到 660 nm,蒸餾水調零。2.打開水浴鍋,調節溫度到 40℃。
3.測定:
試劑名稱(μL) | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
標準液 | 10 | ||
上清液 | 10 | ||
蒸餾水 | 100 | 90 | 90 |
試劑三 | 100 | 100 | 100 |
混勻后置于 40℃水浴保溫 10min,室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度,分別記為 A 空白管、A 標準管、A 測定管。
注意:需在 40min 內完成比色。
三、組織無機磷含量計算:
組織無機磷含量(mmol/g 樣本鮮重)= [C 標準液×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)]×V 總÷W=0.001×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W
C 標準液:1mmol/L;V 總:上清液總體積,1mL=0.001 L;W:樣品質量,g。
注意事項:
1、試劑三需臨用前配制,限當天使用。
2、測定前先用 1~2 個樣品做預實驗,如吸光值大于 1,需用蒸餾水做相應稀釋。